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地址:上海市松江區(qū)曹農(nóng)路5弄40號全自動組織研磨機(jī)破碎酵母細(xì)胞實驗-上海凈信
實驗地點:中科院生物物理所生物大分子國家重點實驗室
用戶:常文瑞組

實驗方法
1、破碎前的準(zhǔn)備:
0.1g菌體(本實驗以0.1g菌體為例);
直徑3號陶瓷珠;
研磨機(jī)(選用品牌上海凈信科技TS-24);
預(yù)處理好的2ML研磨管;
模塊冷凍。
2、研磨:
0.1g菌體,5000r/min離心1 min后去上清,加入等體積的玻璃珠,加入0.5ML PBS溶液,放入預(yù)先冷凍好的模塊中,放入上海凈信科技的研磨機(jī)中,調(diào)整頻率為60Hz,震蕩時間60s.
注:破菌效率隨著液體體積的增加而增加,液體體積達(dá)到100ul時開始達(dá)到最大破菌效率。
附:陶瓷珠回收,以下是方法:
1、將含陶瓷珠的EP管,放置在大燒杯中,用自來水中浸泡2-3天。
2、用鑷子將陶瓷珠和細(xì)胞碎片等全部抖落到燒杯中。靜置待玻璃珠沉淀后,輕輕將上面懸浮的細(xì)胞碎片倒掉,在加水重懸陶瓷珠。
3、重復(fù)步驟2,4-5次直到所有的細(xì)胞碎片都去除干凈。
4、加入適量的濃硝酸(將陶瓷珠全部覆蓋即可),浸泡過夜。
5、去離子水洗三次,置烘箱中干燥即可。

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